液相色譜儀操作易學(xué)難精，其性能高度依賴“正確使用”和經(jīng)驗(yàn)積累。流動相是液相色譜工作者接觸最多、也最易引發(fā)問題的環(huán)節(jié)。HPLC系統(tǒng)最常見的故障是“堵”和“漏”。

一、 液相色譜儀為何會“堵”

液相色譜儀“堵”表現(xiàn)為柱壓異常升高，核心是流路不暢，多發(fā)于色譜柱前端。流動相雜質(zhì)（主要是細(xì)菌）是主因。

堵因一：純水細(xì)菌污染

問題： 國產(chǎn)甲醇通常無需額外過濾，固態(tài)雜質(zhì)可由系統(tǒng)前端過濾頭攔截。致命威脅是水中的細(xì)菌。新制純水放置數(shù)日即長菌，堵塞柱填料空隙，導(dǎo)致液相色譜柱快速報廢。

解決：保障水質(zhì)可靠

理想方案： 購置實(shí)驗(yàn)室專用純水機(jī)。

經(jīng)濟(jì)方案： 購買市售純凈水（如怡寶、娃哈哈500ml）。隨機(jī)抽檢細(xì)菌平板合格后使用，單次成本低。

關(guān)鍵點(diǎn)：水質(zhì)可靠可省過濾！?

原因：

流動相過濾操作易致交叉污染（尤其復(fù)雜配比）。

過濾成本高（裝置易損，濾片昂貴，長期成本遠(yuǎn)超色譜柱）。

堵因二：流動相使用中的細(xì)菌污染

問題： 使用多元液相色譜儀時，習(xí)慣在流路A放純甲醇，流路B放純水（或緩沖鹽）。此方式雖簡便、比例準(zhǔn)，但致命缺陷是水相（尤其緩沖鹽）易在瓶中快速長菌，嚴(yán)重?fù)p害色譜柱。要求每次用新水并實(shí)驗(yàn)后徹底沖洗，但易遺漏。

解決：避免純水流動相！犧牲少許保留時間重復(fù)性，不要單獨(dú)使用純水或緩沖鹽作為流動相組份。

推薦：用10%甲醇水代替純水。 (實(shí)驗(yàn)證實(shí)：≥5%甲醇水可抑菌，≥10%可完全殺菌)。既能作流動相，也可用于沖洗液相色譜柱，一勞永逸防菌。

堵因三：操作不當(dāng)

更換部件型號/接口不匹配，擰緊時變形堵塞。

樣品處理液凈化不徹底，長期積累堵塞六通閥與柱間管路。

手動六通閥轉(zhuǎn)動不到位，形成死堵。

廢液管（尤其金屬管）出口暴露空氣，緩沖鹽結(jié)晶堵塞（較少見但可能）。

查堵方法：

系統(tǒng)通常僅一處堵塞。從檢測器端向泵端逆向分段拆卸部件（色譜柱除外），觀察壓力變化。部件裝上/拆下壓力差顯著者即為堵點(diǎn)。色譜柱堵塞可通過更換同規(guī)格柱對比壓力判斷。

溶劑入口過濾頭：未過濾溶劑或溶劑瓶長菌會降低其壽命，影響液相色譜儀泵性能。建議每3個月清洗/更換。檢查：拔下入口管，若溶劑自由滴出則正常；若堵塞則無/極少滴液。禁用超聲清洗（可能導(dǎo)致玻璃濾芯破碎）。

二、 液相色譜儀為何會“漏”

液相色譜儀“漏”分兩種：漏液（內(nèi)部液體外泄）和漏氣（外部氣體進(jìn)入形成氣泡）。

液相色譜儀漏液：

原因一：液相色譜儀硬件接觸不當(dāng)

液相色譜儀更換管路或色譜柱時，接頭接口不匹配。不同品牌/時期色譜柱接頭差異大。

推薦方案：使用PEEK接頭。 通用性好，手?jǐn)Q即可有效防漏。

匹配接口操作不當(dāng)：過緊、過松或“滑絲”（需加強(qiáng)基本功）。

原因二：液相色譜儀使用不當(dāng)

使用緩沖鹽流動相后，未及時用甲醇水沖洗系統(tǒng)，殘留液干燥結(jié)晶導(dǎo)致微滲（常見于泵）。

注意： 泵微滲通常可沖洗后觀察使用；檢測器漏液（多為流通池問題）維修成本高。

液相色譜儀漏氣（氣泡問題）：

2.1 過濾頭： 流路管持續(xù)不規(guī)則小氣泡。

可能流動相未徹底脫氣（即使有在線脫氣機(jī)，超聲預(yù)處理仍有益），或過濾頭污染。

處理：擰下浸泡稀硝酸，超聲半小時，洗凈裝回。

2.2 泵前透明流路管： 長期停用導(dǎo)致管路液體干涸充滿空氣（不易察覺），泵空轉(zhuǎn)會拉傷活塞桿（尤其殘留鹽分時）。

預(yù)防關(guān)鍵！ 確保液相色譜儀每周至少開機(jī)運(yùn)行一次（最好有實(shí)驗(yàn)），或至少沖洗流動相2小時。人員穩(wěn)定，養(yǎng)成良好習(xí)慣。

已進(jìn)氣處理（外力填充法）：

擰下泵入口接頭。

用洗耳球尖端對準(zhǔn)管口，吸液至液面接近洗耳球（約5cm）。

快速擰回接頭。

開機(jī)，開排液閥啟動泵，待排液無氣泡后關(guān)閉排液閥。

2.3 泵與色譜柱： 進(jìn)入氣泡一般易沖洗掉。

2.4 檢測器： 氣泡在基線上表現(xiàn)為間隔的直上直下大峰。常規(guī)流量沖不走時，需拆柱，將檢測器直接連泵出口，大流量沖洗。

? ?正確維護(hù)流動相水質(zhì)、避免單獨(dú)水相、規(guī)范操作、定期運(yùn)行/沖洗是保障液相色譜儀穩(wěn)定運(yùn)行、減少“堵”“漏”故障的關(guān)鍵。預(yù)防遠(yuǎn)勝于維修！